病毒保存液病毒滅活效果檢測(cè)

病毒保存液適用于病毒、流感病毒、手足口病毒等常見(jiàn)病毒樣本采集保存運(yùn)輸工作，是采樣管內(nèi)浸末采樣拭子病毒樣本一種保護(hù)病毒的被檢測(cè)物質(zhì)的液體，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位組織樣本，儲(chǔ)存的樣本可用于后續(xù)的核酸提取或純化等臨床實(shí)驗(yàn)。

病毒保存液通常分為兩種，一種是非滅活型，能夠保護(hù)病毒的蛋白和核酸，另一種是滅活型，通常含有滅活病毒的裂解鹽，裂解蛋白而保護(hù)核酸。

滅活型病毒保存液：主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液，里面添加有高濃度的裂解鹽，能夠迅速高效地使待測(cè)樣本利的病毒蛋白裂解失活，可以有效防止感染，同時(shí)又含有Rnase酶抑制劑，能保護(hù)病毒核酸不被降解，后續(xù)的NT-PCR實(shí)驗(yàn)只要能檢測(cè)出病毒的核酸即可以做出診斷。而且能在常溫下保存相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間。

非滅活型保存液：主要是以運(yùn)送培養(yǎng)基為基礎(chǔ)改良的病毒維持液型保存液。這一種是同時(shí)保留了病毒的蛋白質(zhì)外殼以及病毒核酸DNA或者RNA，這樣病毒在體外具有蛋白抗原表位和核酸的完整性，當(dāng)然操作失誤時(shí)也有一定的感染性風(fēng)險(xiǎn)。采樣后長(zhǎng)時(shí)間保存需要保持嚴(yán)格低溫。

中科檢測(cè)可開(kāi)展針對(duì)流感病毒、腸道病毒、冠狀病毒、皰疹病毒等病毒保存液病毒滅活效果檢測(cè)，病毒保存液檢測(cè)可針對(duì)不同保存溫度、不同保存時(shí)間等不同條件下的病毒活性及病毒滅活率。

病毒保存液檢測(cè)方法

1. 試驗(yàn)對(duì)象：

毒株:甲型流感病毒HINI (VR- 1469)

細(xì)胞: MDCK細(xì)胞.

2.試驗(yàn)步驟：

1）取樣品病毒保存液（非滅活型） 9.8mL，加入0.2mL病毒原液混勻，分裝若干測(cè)試液，存至要求溫度;

2）保存至對(duì)應(yīng)天數(shù)后取出測(cè)試液，檢測(cè)病毒滴度；

a）10倍倍比稀釋測(cè)試液；

b）將稀釋液加入含生長(zhǎng)至單層的MDCK細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，并設(shè)置正常對(duì)照組，加等量培養(yǎng)液；

c）置于35'C、5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育60 min后棄去上清液，加入雙抗400 IU/mL的維持培養(yǎng)液繼續(xù)孵育3~5天，每天觀察細(xì)胞增長(zhǎng)狀況；

d）當(dāng)接種病毒的MDCK細(xì)胞出現(xiàn)變圓或縮小等病變現(xiàn)象時(shí)，記錄產(chǎn)生細(xì)胞病變的情況;

e）根據(jù)Reed-Muench公式計(jì)算半數(shù)感染量TCID50。

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